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细胞培养的操作过程

发布时间: 2022-05-23  点击次数: 242次
   细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养,既包括微生物细胞的培养,也包扩细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
  细胞培养操作过程:
  注意无菌。无论哪一管液体,开盖后尽量立即关上(如果有几瓶都需要开的,也注意,可以虚盖)。盖子向上放。操作时不要从开盖的容器上方经过。另外,无菌台面上摆放的各种东西,最好是一字摆开,平行于自己。尽量不要前后重叠。
  细胞操作中所用的所有耗材试剂最好都是细胞培养专用。一般都以一次性耗材居多。1ML枪头为加长型专用培养枪头。移液管亦有专用10mL一次性无菌移液管
  (1)细胞换液:
  培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液,加入新培养液。
  (2)细胞传代:
  传代之前先观察,细胞是否密集,是否开始融合。一般融合达到70-80%就可以传代。早点传代也可以。
  如果是贴壁生长的细胞:
  1) 培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液;
  2) 无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次(按培养体积加入);
  3) 加入适量胰酶消化适当时间(一般胰酶为0.25%;9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑,一般如果是细胞株,非原代培养,消化1-2分钟足矣);
  4) 用枪头吹打数十次(视细胞类型而定。一般细胞株30-50次吧,耗时一般2分钟左右);
  5) 加入适量体积*培养基终止胰酶消化(如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,可以加入1mL*培养基;现在培养瓶(皿)里有2mL溶液)。
  6) 现在可以将溶液进行分瓶(2mL)。如果是细胞株,直接均分到两个培养瓶(皿)里。如果是原代培养,可以根据消化时间来对细胞进行分离;因此可以将溶液(2mL)都转入新的培养瓶(皿)。
  7) 将两个培养瓶(皿)补足*培养基到正常体积(果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,为5mL*培养液)
  8) 镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁,悬浮在溶液中,呈圆形。一般2h之内会贴壁,如果已经贴壁,根据细胞类型有不同的形态,但通常都不是圆形。
  9) 镜下观察无误之后,再放入细胞培养箱。培养瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。
  10) 传代之后,最好第二天细胞换液一次。当然,也可以视情况而定。
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